Aislación y caracterización de células madre mesenquimales provenientes de pulpa y folículo dentario humano / Isolation and characterization of mesenchymal stem cells from human dental pulp and follicle

Recientemente se ha descubierto que diversos tejidos dentales son fuente importante de Células Madre Mesenquimales (CMM). En la cavidad oral podemos encontrar CMM en la pulpa, en el folículo dental, papila y en la encía entre otros lugares. Varios estudios avalan el extenso potencial terapéutico de las CMM en terapias de regeneración. El objetivo de este estudio es aislar, cultivar células madres mesenquimales de pulpa y folículo dental humano, caracterizar su inmunofenotipo y su potencial de diferenciación a linaje osteogénico, condrogénico y osteogénico. Se cultivaron células de pulpa y folículo dental de terceros molares de dientes permanentes jóvenes humanos. Los cultivos de CMM fueron monitoreados por microscopia óptica, las células se inmunotipificaron por citometría de flujo. Posteriormente se evaluó su capacidad de diferenciaron a los tres linajes mencionados. En estas condiciones experimentales se comprobó que las células aisladas y cultivadas de pulpa y folículo dental correspondían a células madre mesenquimales humanas, siendo éstas últimas más fáciles de obtener y proliferar. Las CMM de folículo dental poseen mayor potencial de crecimiento y capacidad de diferenciación en comparación a las CMM de pulpa dental, probablemente debido a su estado evolutivo más inmaduro.

It was recently discovered that dental tissues are important sources of mesenchymal stem cells (MSCs). In the oral cavity MSCs can be found in the pulp, dental follicle, apical papilla and gingival tissue, among others. Many studies support the therapeutic potential of MSCs in regenerative therapies. The objective of this study was to isolate and culture mesenchymal stem cells from human dental pulp and follicle, and to characterize their immunophenotype and differentiation potential to adipogenic, chondrogenic and osteogenic lineages. Oral cavity stem cells were cultured from pulp and dental follicle of wisdom teeth from young permanent teeth. Immunotypification of MSCs was performed by flow cytometry and cultures were evaluated for their ability to differentiate into the three lineages mentioned. Our results corroborate that cultured oral MSC cells isolated from pulp and dental follicle were mesenchymal in origin, being the latter more easy to obtain. Dental follicle MSCs have greater growth potential and differentiation capacity compared to dental pulp MSCs, probably due to their more immature developmental state.

Evaluación de la proliferación de células madres mesenquimales estimuladas con diferentes intensidades de ultrasonido de baja intensidad / Evaluation of mesenchymal stem cell proliferation using different low intensity pulsed ultrasound intensities

Las células madres mesenquimales (CMM) pueden ser afectadas en su capacidad de proliferar in vitro bajo estimulación física o bioquímica, siendo esta una capacidad esencial para un adecuado cultivo celular. Un método de estimulación física que ha demostrado ser eficiente en este sentido es el Ultrasonido pulsátil de baja intensidad (USBI), aplicado en intensidades iguales o inferiores a 100 mW/cm2, habitualmente entre 30 y 50 mW/cm2. El objetivo de esta investigación fue determinar el nivel de intensidad de ultrasonido pulsátil de baja intensidad óptimo entre 30 y 50 mW/cm2 para estimular la proliferación de CMM de médula ósea de ratas Sprague Dawley, in vitro. CMM (1x106cls/kg) de medula ósea de rata Sprague-Dawley fueron cultivadas (alfa-MEM, 20 por ciento FBS y 1 por ciento antibiotico) y estimuladas con USBI (0,02 milisegundos), por 20 minutos dos veces al día por 10 días con intensidades de 0, 30 y 50 mW/cm2 (grupos A [control], B, C respectivamente). Se contabilizó el número de células en el cultivo y se evaluó morfología celular en microscopio óptico. Se utilizaron tests de ANOVA on Ranks y Bonferroni. Los cultivos estimulados con USBI presentaron mayores recuentos celulares, y se observaron diferencias estadísticamente significativas entre los grupos A y C (p<0,05). Se observaron diferencias morfológicas entre células de grupos estimulados con USBI y el control. La estimulación de las CMM en cultivos bidimensionales con USBI influencia cambios en la morfología celular y se concluye que 50mW/cm2 es la intensidad óptima dentro de las evaluadas para producir aumento en la proliferación celular (p<0.05).

Mesenchymal stem cells (MSCs) can be affected in their capabilities to proliferate in vitro under physical and/or biochemical stimulation. The aim of this study was to select an optimal intensity level for low intensity pulsed ultrasound (LIPUS) stimulation of Sprague-Dawley bone marrow MSCs proliferation in vitro. Bone marrow MSCs of Sprague-Dawley rats where cultured (a-MEM, 20 percent FBS and 1 percent antibiotic) and stimulated with LIPUS (0,02 milisec), for 20 minutes twice daily for 10 days, at intensities of 0 (control), 30 and 50mW/cm2 (groups A, B, C). Cellular count and morphological evaluation were performed. ANOVA and Bonferroni tests were performed. LIPUS-stimulated cultures displayed greater cellular counts, and significant differences were observed between groups A and C (p<0,05). Morphological differences were observed between cells from LIPUS-stimulated and control groups. An intensity of 50mW/cm2 elicits increased cellular proliferation (p<0.05). Stimulation of MSCs cultures with LIPUS influences cellular morphology.